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裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)
來(lái)源：萬(wàn)物生物 發(fā)布時(shí)間：2021-11-02
裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)
一、移植性腫瘤動(dòng)物模型
目前臨床所用的抗腫瘤藥中，大多數(shù)是經(jīng)動(dòng)物移植性腫瘤試驗(yàn)篩選而發(fā)現(xiàn)的。應(yīng)用動(dòng)物移植性腫瘤篩選藥物的優(yōu)點(diǎn)是：使一群動(dòng)物同時(shí)接種同樣量的瘤細(xì)胞，生長(zhǎng)速率比較一致，個(gè)體差異較小，接種成活率近100%，對(duì)宿主的影響相類似，易于客觀判斷療效，可在同種或同品系動(dòng)物中連續(xù)移植，長(zhǎng)期保留供試驗(yàn)用，試驗(yàn)周期一般均較短，試驗(yàn)條件易于控制等。因此目前抗腫瘤藥篩選大多數(shù)采用動(dòng)物移植瘤作為篩選模型。目前世界上保存的動(dòng)物移植腫瘤約有400株，但篩選試驗(yàn)常用者僅20～30種。據(jù)1984年統(tǒng)計(jì)，我國(guó)在同系、同種動(dòng)物中已建立各種動(dòng)物和人的常見(jiàn)的瘤株64個(gè)。例如小鼠肺腺瘤（HP615）、小鼠子宮頸瘤27號(hào)（U27）、小鼠腦瘤22（B22）、小鼠淋巴細(xì)胞性血病（L615）、裸鼠人肝瘤移植瘤和人腦惡性膠質(zhì)細(xì)胞瘤（NCS—1）等。
動(dòng)物腫瘤可通過(guò)移植傳代而培養(yǎng)出所需要的腫瘤細(xì)胞株。瘤株是一種組織學(xué)類型和生長(zhǎng)特性已趨穩(wěn)定，并能在同系或同種動(dòng)物中連續(xù)傳代的腫瘤細(xì)胞模型。腫瘤移植于健康動(dòng)物，相當(dāng)于活體組織培養(yǎng)，可長(zhǎng)期保存瘤種，供實(shí)驗(yàn)所用。
實(shí)驗(yàn)中常用腹水瘤和實(shí)體瘤兩種方式進(jìn)行移植。對(duì)于會(huì)產(chǎn)生腹水的腫瘤，可將其一定數(shù)量的細(xì)胞注入受體動(dòng)物腹腔形成腹水瘤或產(chǎn)生腹水。實(shí)體瘤移植也是在無(wú)菌條件下，把實(shí)體瘤切成2～3mm小塊，植于受體動(dòng)物皮下。
二、誘發(fā)性腫瘤動(dòng)物模型
1．肝癌 二乙基亞硝胺（DEN）誘發(fā)大白鼠肝癌：取體重250g左右的封閉群大白鼠，雌雄不拘。按性別分籠飼養(yǎng)。除給普通食物外，飼以致癌物，即用0.25轓水溶液灌胃，劑量為10mg/kg，每周一次，其余5天用0.025轓水溶液放入水瓶中，任其自由飲用。共約4個(gè)月可誘發(fā)成肝癌?；騿斡?.005%摻入飲水中口吸服8個(gè)月誘發(fā)肝癌。4-2甲基氨基氮苯（DBA）誘發(fā)大鼠肝癌：用含0.06跘的飼料喂養(yǎng)大鼠，飼料中維生素B2不應(yīng)超過(guò)1.5～2mg/kg，4～6月就有大量的肝癌誘發(fā)成功。2-乙酰氨基酸（2AAF）誘發(fā)小鼠、狗、貓、雞、兔肝癌：給成年大鼠含0.03*AF標(biāo)準(zhǔn)飼料。每日每平均2～3mg2AAF（也可將2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%動(dòng)物產(chǎn)生肝腫瘤。二乙基亞硝胺誘發(fā)大鼠肝癌：用劑量為每日0.3～14mg/kg體重，混于飼料或飲水中給予，6～9個(gè)月后255/300大鼠發(fā)生了肝癌。亞胺基偶氮甲苯（OAAT）誘發(fā)小鼠肝癌：用1%OAAF苯溶液（約0.1ml含1mg）涂在動(dòng)物的兩肩胛間皮膚上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。實(shí)驗(yàn)后7～8周即而出現(xiàn)第一個(gè)肝腫瘤，7個(gè)月以上可誘發(fā)小鼠肝腫瘤約55%?；蛴?.5mgOAAT溶于葵瓜子油中，給C3H小鼠皮下注射4次，每日間隔10天，也可誘發(fā)成肝癌。黃曲霉素誘發(fā)大鼠肝癌：每日飼料中含0.001～0.015ppm，混入飼料中喂6個(gè)月后，肝癌誘發(fā)率達(dá)80％。
2．胃癌 甲基膽蒽誘發(fā)小鼠胃癌：取20g左右的小鼠，無(wú)菌手術(shù)下，在腺胃粘膜面穿掛含甲基膽蒽（MC）線結(jié)。含MC的線結(jié)是用普通細(xì)線，在一端打結(jié)后，將線結(jié)置于盛 有MC小玻璃試管內(nèi)，在酒精燈上微微加溫，使MC液化滲入線結(jié)。MC濃度為0.05～0.1g20-甲基膽蒽內(nèi)浸入10～20根線。手術(shù)埋線后4～8個(gè)月可誘發(fā)成功胃癌。用不對(duì)稱亞硝胺，劑量為0.25ml/kg體重，3個(gè)月后全部動(dòng)物發(fā)生前胃乳頭狀癌，7～8個(gè)月后有85～100%發(fā)生前胃癌。昆明種最敏感。A系次之，615系小鼠敏感性最差。此外還可用甲基亞硝基醋酸尿素給BD大鼠飲水中加2mg/kg體重，每周5次飲用，520天后全部大鼠均發(fā)生了腺胃癌。
3．食管癌 甲基芐基亞硝胺（MBNA）誘發(fā)大鼠食管癌：取體重100g以上的Wistar大鼠，任其食用含甲基芐基亞硝胺的飲水，并將MBNA摻入飼料中使每日攝入量達(dá)0.75～1.5mg/kg體重。80～100天可誘發(fā)成食管癌。也可用二烴黃樟素（Dihydrosafrole），它是一種制備啤酒的調(diào)味品，在大鼠飼料中加入百萬(wàn)分之二千五百至一萬(wàn)（2500～10000ppm）黃樟素，就能引起20～75%的食管癌。用0.2%或0.005%的甲基芐基亞硝胺水溶液，給動(dòng)物經(jīng)口灌喂，每天一次，大鼠灌注劑量1mg/kg體重，至第27天即發(fā)現(xiàn)一例食管乳頭狀瘤，154天發(fā)現(xiàn)第一例食管癌，11個(gè)月食管癌的發(fā)生率為53%。
4．肺癌 二乙基亞硝胺（DEN）誘發(fā)小鼠肺癌：小白鼠每周皮下注射1轓水溶液一次，每次劑量56mg/kg，DEN總劑量達(dá)到868mg，觀察時(shí)間為100天左右時(shí)，發(fā)癌率可達(dá)40%。而DEN總劑量達(dá)到1176mg，觀察時(shí)間為半年左右時(shí)；發(fā)癌率可達(dá)94%。烏拉坦誘發(fā)肺腺癌：小鼠（A系，1～11/2月齡）較大鼠敏感，每次每只腹腔注入10%烏拉坦生理鹽水液0.1～0.3ml，間隔3～5日再注，共注2～3個(gè)月，每只小鼠用量約為100mg，注后3個(gè)月肺腺癌發(fā)生率為100%，而且多數(shù)為多發(fā)性，這種誘發(fā)瘤為良性。此外還可用氣管內(nèi)注入苯并芘、硫酸銨氣溶膠、甲基膽蒽等誘發(fā)肺癌。如猴氣管內(nèi)注入3，4苯并芘（苯并花為3～15mg與等量之Fe2O3混合液），每周一次，共10次，6只猴中有2只誘發(fā)肺的鱗狀上皮癌。亦有人用硫酸胺氣溶劑給100只大鼠吸入，13個(gè)月后所有大鼠都發(fā)生了肺腺癌。用0.2%明膠作懸浮劑將甲基膽蒽混合后給金地鼠氣管內(nèi)注入，每次0.1ml（含甲基膽蒽5mg）每周一次，共6次，53周后有62.5%動(dòng)物發(fā)生了肺癌。
5．鼻咽癌 二甲基膽蒽（MC）誘發(fā)大鼠鼻咽癌：取直徑2～3mm的硬質(zhì)塑米管，在酒精燈上小火拉成錐形，每段長(zhǎng)約3.5cm，管內(nèi)填以結(jié)晶體MC。小管一端用火封閉，以防藥物外溢，尖端用針刺數(shù)孔，使MC能從小妃溢出。取體重120g左右的大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，由前鼻孔將上述含MC的塑料小管插入鼻腔，利用前鼻孔較小管粗端為小的特點(diǎn)，稍加用力，迫使小管全部進(jìn)入鼻腔內(nèi)，其尖部可達(dá)鼻咽腔。不需另加固定，即可使小管長(zhǎng)期留于鼻腔內(nèi)。待到預(yù)定時(shí)間（半年以上），或動(dòng)物自行死亡時(shí)，到其鼻咽部，10%福爾馬林固定，脫鈣后，石蠟包埋，進(jìn)行連續(xù)切片。發(fā)癌率可達(dá)60%以上。二乙基亞硝胺滴鼻法誘發(fā)鼻咽癌：取120g左右大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，用磨平針尖的8號(hào)針頭，從前鼻孔輕輕插入，針尖可達(dá)鼻咽腔。經(jīng)注射器灌注用1%吐溫-80新配的33.3轓混懸液0.02ml(含DEN6.7mg)每周1次，共15～20次，可誘發(fā)成鼻咽癌。
6．宮頸癌 取雌性小白鼠，以附有0.1mgMC的棉紗線結(jié)在動(dòng)物不麻醉的狀態(tài)下，借助于陰道擴(kuò)張器及磨純的彎針，將線穿入宮頸。經(jīng)右宮角背部穿出，使線結(jié)固定于宮頸口。線的另一端則固定于背部肌肉，縫合皮膚，掛線以后，同日開始連續(xù)注射青霉素2～3天。以防術(shù)后感染。至一定時(shí)間（半年左右）處死動(dòng)物，宮頸組織用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，連續(xù)切片。
7．結(jié)腸癌 給四周齡的雄性大白鼠，皮下注射二甲基芐肼（Dimethlhydrazine,DMH）每周一次，連續(xù)21周，每次DMH21mg/kg。最后一次給藥后1～4周，處死動(dòng)物。降結(jié)腸部位用Bouin液固定，脫水，石蠟包埋，切片。所用之DMH先配成每100ml含400mg的母液，并加EDTA37mg，用氫氧化納（0.1N）液將pH調(diào)至6.5備用。
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標(biāo)書基金實(shí)驗(yàn)咨詢 表觀遺傳組學(xué)分析
課題實(shí)驗(yàn)結(jié)題指導(dǎo) 細(xì)胞分子功能驗(yàn)證
實(shí)驗(yàn)培訓(xùn)文章潤(rùn)色 動(dòng)物模型裸鼠成瘤
臨床檢測(cè)科研轉(zhuǎn)化 病理染色分子互作