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產(chǎn)品詳情
操作說明
注意事項
產(chǎn)品簡介
PEI 40K Transfection Reagent（線性化聚乙烯亞胺轉(zhuǎn)染試劑），是一種以線性化聚乙烯亞胺為主體、分子量為40000的高電荷陽離子聚合物，其本身帶正電，可以有效的結(jié)合帶負(fù)電的核酸，與之形成復(fù)合物，并導(dǎo)入到細(xì)胞中，適用于細(xì)胞的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染。PEI 40K（線性化聚乙烯亞胺）轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞毒性低，轉(zhuǎn)染效率高且成本低，相較于脂質(zhì)體類轉(zhuǎn)染試劑，性價比極高。目前已經(jīng)驗證線性PEI 40K轉(zhuǎn)染試劑廣泛適用于多種細(xì)胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela細(xì)胞等，轉(zhuǎn)染效率高達(dá)80%~90%。本產(chǎn)品主要成分PEI 40K濃度為1 mg/mL。
儲存與運(yùn)輸
冰袋（wet ice）運(yùn)輸；4℃保存，有效期至少6個月；長期不用可-20℃保存更長時間，避免反復(fù)凍融。
組成
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Component |
G1802-1ML |
G1802-10ML |
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PEI 40 K Transfection Reagent |
1 mL |
10×1 mL |
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產(chǎn)品說明書 |
1份 | |
操作步驟
1. 貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染前準(zhǔn)備工作（6孔板為例，其他規(guī)格參考附表）：
a) 轉(zhuǎn)染前一天，將細(xì)胞以合適的密度均勻種植于孔板中，以正式轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯聚至70-85%為宜；
b) 轉(zhuǎn)染前，去除原細(xì)胞培養(yǎng)基，用PBS清洗1-2次后，更換1.8 mL不含血清或者低血清（5%以下）的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，或Opti-MEM；不同細(xì)胞對于血清依賴性不同，根據(jù)具體細(xì)胞種類調(diào)整。
c) 將換好液的細(xì)胞放置于培養(yǎng)箱中，并開始配制轉(zhuǎn)染復(fù)合物。
2. 懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染前準(zhǔn)備工作：
a) 轉(zhuǎn)染當(dāng)天，將適量的細(xì)胞，離心去除培養(yǎng)基后，用不含血清或者低血清（5%以下）的基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸；
b) 將準(zhǔn)備好的懸浮細(xì)胞放置到培養(yǎng)箱中，并開始配制轉(zhuǎn)染復(fù)合物，轉(zhuǎn)染復(fù)合物和培養(yǎng)基之間的體積比，可以參考貼壁細(xì)胞的比值，進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。
3. 轉(zhuǎn)染復(fù)合物準(zhǔn)備：
a) 配制A液：100 μL不含血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基與2 μg質(zhì)粒DNA，吹吸混勻；
b) 配制B液：100 μL不含血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基與6-8 μL PEI 40 K Transfection Reagent，吹吸混均；
c) 將B液加到A液中，輕輕吹打混均，室溫孵育15 min，使其形成DNA-PEI轉(zhuǎn)染復(fù)合物。
4. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞：
a) 將上一步得到的轉(zhuǎn)染復(fù)合物，以畫十字或者環(huán)繞的方式，滴加到之前換好液的孔板中；
b) 手持孔板在平面上畫“8”字或其他的方式輕搖培養(yǎng)板，使其混合充分，置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
c) DNA-PEI轉(zhuǎn)染復(fù)合物與細(xì)胞共同孵育4-6 h即有較好的轉(zhuǎn)染效率，適當(dāng)延長或過夜孵育，轉(zhuǎn)染效率更佳。
注意事項
1. 請使用狀態(tài)良好的健康細(xì)胞，復(fù)蘇的細(xì)胞建議至少傳代2次后再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
2. 請使用高質(zhì)量、無內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA。
3. 轉(zhuǎn)染時高濃度血清以及抗生素的使用，可能會影響細(xì)胞狀態(tài)以及轉(zhuǎn)染效率。
4. 不同的細(xì)胞耐受性、敏感性不一樣，轉(zhuǎn)染孵育時間長短，以及PEI/DNA使用比例，可視情況酌情調(diào)整。
5. 操作時請穿實驗服，佩戴一次性手套。
附表：不同細(xì)胞培養(yǎng)容器轉(zhuǎn)染使用量（僅供參考）
|
培養(yǎng)器皿 |
生長面積 （cm2） |
接種細(xì)胞數(shù) |
DNA量 （μg） |
PEI （μL） |
轉(zhuǎn)染復(fù)合物體積 （μL） |
總體積 （mL） |
|
96孔板 |
0.3 |
(2-4)×104 |
0.1 |
0.3-0.4 |
10 |
0.1 |
|
24孔板 |
1.9 |
(1.2-2.4)×105 |
0.5-1 |
1.5-4 |
50 |
0.5 |
|
12孔板 |
3.8 |
(2.4-4.8)×105 |
1-2 |
3-8 |
100 |
1 |
|
6孔板 |
9.5 |
(6-10)×105 |
2-4 |
6-16 |
200 |
2 |
|
10 cm培養(yǎng)皿 |
55 |
(4-6)×106 |
12-24 |
36-96 |
1000 |
12 |
|
T75培養(yǎng)瓶 |
75 |
(6-10)×106 |
18-36 |
54-144 |
1000 |
15 |
本產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
凡合肥萬物生物科技有限公司銷售的產(chǎn)品均有嚴(yán)格的質(zhì)量保證。如發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品存在包裝規(guī)格疑問，請于收貨之日起七日內(nèi)向我公司總部或當(dāng)?shù)剞k事處提出，并請保證該產(chǎn)品，以備本公司進(jìn)行核對檢驗。如果發(fā)現(xiàn)有質(zhì)量問題，請于收貨后一月內(nèi)保留產(chǎn)品50%以上的量，以便本公司回收產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)檢，確認(rèn)產(chǎn)品質(zhì)量。如逾期，則視為已經(jīng)對本公司產(chǎn)品進(jìn)行驗收。 聲明：如發(fā)生產(chǎn)品索賠事宜，本公司僅在產(chǎn)品價格范圍內(nèi)酌情賠償，恕不接受超出產(chǎn)品價格范圍之賠償。客戶在使用過程中有任何技術(shù)問題可以撥打技術(shù)售后服務(wù)電話我們隨時給予解答。
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