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產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格 |
支原體檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光法) |
FKU018 |
20T |
產(chǎn)品簡介
本支原體檢測(cè)試劑盒是利用支原體中特有酶的活性設(shè)計(jì)而成,該酶可將支原體檢測(cè)試劑中特有的底物分解同時(shí)將ADP轉(zhuǎn)換成ATP,螢光素酶在ATP存在下催化螢光素氧化發(fā)出生物螢光,可通過化學(xué)發(fā)光儀(luminometer)進(jìn)行測(cè)定,以反應(yīng)待檢樣品是否存在支原體污染。整個(gè)檢測(cè)過程操作簡單,只需兩個(gè)步驟,耗時(shí)約15 min。該方法靈敏度高,檢測(cè)的是真正具有生物活性的支原體,所以檢測(cè)結(jié)果比PCR方法更準(zhǔn)確。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
冰袋(wet ice)運(yùn)輸;-20℃保存,支原體檢測(cè)試劑A需避光保存;有效期12個(gè)月。
組成
Component Number |
Component |
G1901-20T |
G1901-1 |
支原體檢測(cè)試劑A |
1 mL |
G1901-2 |
支原體檢測(cè)試劑B |
1 mL |
說明書 |
1份 |
操作步驟
1. 取適量(1 mL足夠)培養(yǎng)3-6天的細(xì)胞上清,400 g離心3 min,以去除沉淀少量漂浮細(xì)胞或碎片,取上清立即檢測(cè),或者4℃保存在一周內(nèi)檢測(cè),或者-80℃保存半年內(nèi)檢測(cè);
2. 將所有檢測(cè)試劑和檢測(cè)樣品均平衡至室溫,最適宜的溫度為20-25℃;
3. 在96孔檢測(cè)板(非透明板,建議用專用96孔白板)中加入50 μL待檢測(cè)樣品、陰性對(duì)照(如無菌水或PBS);
4. 加入50 μL支原體檢測(cè)試劑A,輕柔混勻不要產(chǎn)生氣泡,室溫(20-25℃)避光放置5 min。然后用具有檢測(cè)化學(xué)發(fā)光的酶標(biāo)儀進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測(cè),計(jì)讀數(shù)為A。(請(qǐng)根據(jù)儀器靈敏度適當(dāng)調(diào)整相應(yīng)的參數(shù),每個(gè)孔的檢測(cè)時(shí)間一般為0.25-1 s);
5. 加入50 μL的支原體檢測(cè)試劑B,輕柔混勻不要產(chǎn)生氣泡,室溫(20-25℃)避光放置10 min。然后用具有檢測(cè)化學(xué)發(fā)光的酶標(biāo)儀進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測(cè),計(jì)讀數(shù)為B。(注:請(qǐng)嚴(yán)格按照加入支原體檢測(cè)試劑B后10 min進(jìn)行檢測(cè),不應(yīng)提前或延后,否則會(huì)影響結(jié)果判斷);
6. 計(jì)算比值(Ratio)=讀值B/讀值A(chǔ)。
A. 如果B/A>1.1,說明細(xì)胞培養(yǎng)物中存在支原體污染;
B. 如果B/A<0.9,說明細(xì)胞培養(yǎng)物中沒有支原體污染;
C. 如果B/A比值在0.9-1.1之間,建議繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞24-48 h后,再次檢測(cè)確定是否存在支原體污染。如果B/A比值仍在0.9-1.1之間,則該細(xì)胞培養(yǎng)物沒有支原體污染,為支原體陰性。
注意事項(xiàng)
1. 支原體檢測(cè)試劑A中含有螢光素酶,反復(fù)凍融會(huì)逐漸使其失活,建議第一次解凍后應(yīng)適當(dāng)分裝保存,分裝容器需潔凈無污染。
2. 檢測(cè)時(shí)強(qiáng)烈建議使用白色或者黑色不透光96孔板,使用普通透明96孔板會(huì)使得相鄰檢測(cè)孔出現(xiàn)干擾。
3. 人體皮膚表面含有豐富的ATP,檢測(cè)時(shí)請(qǐng)帶好實(shí)驗(yàn)手套、口罩,其他耗材也應(yīng)潔凈、無污染,防止外源引入ATP污染。
4. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
產(chǎn)品僅供科研用途,不用于臨床診斷!
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