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原代細(xì)胞制備與培養(yǎng)
將動(dòng)物各種組織從機(jī)體中取出,經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA) 或機(jī)械方法處理,分散成單細(xì)胞,在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖,萬物生物提原代培養(yǎng)服務(wù)供給您高質(zhì)量的原代細(xì)胞株。原代培養(yǎng)的基本過程包括取材、培養(yǎng)材料的制備、接種及培養(yǎng)等步驟。原代培養(yǎng)的方法很多,基本和最常用的是組織塊培養(yǎng)法和分離細(xì)胞法。
基本操作過程
1)、用培養(yǎng)液濕潤所取組織材料,并用鋒利的眼科剪將附在其上的脂肪和結(jié)締組織去除干凈。再用平衡液(PBS)或Hanks液漂洗;用鋒利的眼科彎剪將組織塊剪成小塊;再用PBS或Hanks液漂洗多次,直至液體不渾濁、無油滴、清亮為止。
2)、用濕潤的吸管吸取切碎的組織塊,清清吹到培養(yǎng)瓶皿中,并將其按一定間距均勻放在培養(yǎng)瓶底壁上,量不要過多,要將組織塊切面貼在培養(yǎng)瓶底壁上;
3)、將培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn),使瓶底朝上,在種植了組織塊一側(cè)的對側(cè)面加足培養(yǎng)液,勿使組織塊與培養(yǎng)液接觸,塞緊瓶塞;
4)、將種植了組織塊的一側(cè)朝上,靜置于37℃培養(yǎng)箱中;待組織塊貼壁1h到3h后翻瓶,使貼壁的組織塊浸沒與培養(yǎng)液中,靜置; 5)、每隔2到3天更換一次培養(yǎng)液,或者根據(jù)培養(yǎng)瓶種顏色的變化確定換液時(shí)間。
提供凍存或處于對數(shù)生長期的細(xì)胞株一瓶(細(xì)胞培養(yǎng)條件,圖片)。
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標(biāo)書基金實(shí)驗(yàn)咨詢 表觀遺傳組學(xué)分析
課題實(shí)驗(yàn)結(jié)題指導(dǎo) 細(xì)胞分子功能驗(yàn)證
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