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使用目的:
本試劑盒用于測定血清、血漿及相關(guān)液體樣本中的指標(biāo)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中指標(biāo)水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度。
試劑盒組成
1 |
30倍濃縮洗滌液 |
20ml×1瓶 |
7 |
終止液 |
6ml×1瓶 |
2 |
酶標(biāo)試劑 |
6ml×1瓶 |
8 |
標(biāo)準(zhǔn)品 |
0.5ml×1瓶 |
3 |
酶標(biāo)包被板 |
12孔×8條 |
9 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
1.5ml×1瓶 |
4 |
樣品稀釋液 |
6ml×1瓶 |
10 |
說明書 |
1份 |
5 |
顯色劑A液 |
6ml×1瓶 |
11 |
封板膜 |
2張 |
6 |
顯色劑B液 |
6ml×1/瓶 |
12 |
密封袋 |
1個 |
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可在小試管中進(jìn)行稀釋。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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1、已超過受理期限的產(chǎn)品,如過保質(zhì)期。
2、由于客戶自身操作原因?qū)е聦?shí)驗(yàn)失敗。
3、由于客戶沒有仔細(xì)確認(rèn)要訂購的指標(biāo),導(dǎo)致自己的指標(biāo)定錯。
4、產(chǎn)品已使用(質(zhì)量問題除外)。
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