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SweScript RT I First Strand cDNA Synthesis Kit
價(jià)格：
在線咨詢(xún)
貨號(hào)：
SJ21583
產(chǎn)品規(guī)格：
50 rxns
購(gòu)買(mǎi)數(shù)量：
產(chǎn)品詳情
操作說(shuō)明
注意事項(xiàng)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本產(chǎn)品利用改造后的突變體逆轉(zhuǎn)錄酶以總RNA或mRNA為模板，高效逆轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA，試劑盒中包含合成高質(zhì)量第一鏈cDNA所需的全部試劑，并提供兩種cDNA合成引物供選擇：Random Hexamer Primer和Oligo (dT)18 Primer，合成的單鏈cDNA產(chǎn)物可直接用來(lái)進(jìn)行后續(xù)PCR或qPCR反應(yīng)。SweScript RT I (Reverse Transcriptase)是基于M-MLV Reverse Transcriptase并通過(guò)體外進(jìn)化篩選獲得的突變體逆轉(zhuǎn)錄酶，SweScript RT I無(wú)RNase H活性，避免了第一鏈cDNA合成反應(yīng)中DNA/RNA雜交體模板中RNA被降解，從而保證第一鏈cDNA合成量和長(zhǎng)度；與野生型酶相比，SweScript RT I的熱穩(wěn)定性和合成效率大幅提高，可在42-55℃范圍內(nèi)高效合成cDNA，同時(shí)也可合成長(zhǎng)達(dá)10 kb的cDNA。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
冰袋（wet ice）運(yùn)輸；
-20℃保存，12個(gè)月有效期。
組成
|
Component Number |
Component |
G3330-50 |
G3330-100 |
|
G3330-1 |
SweScript RT I Enzyme Mixa |
50 μL |
100 μL |
|
G3330-2 |
5×Reaction Bufferb |
200 μL |
400 μL |
|
G3330-3 |
Oligo (dT)18 Primer (100 μM) |
50 μL |
100 μL |
|
G3330-4 |
Random Hexamer Primer (100 μM) |
50 μL |
100 μL |
|
G3330-5 |
Nuclease-Free Water |
1 mL |
1 mL |
|
說(shuō)明書(shū) |
1份
|
1份 |
|
a：含有RNase Inhibitor
b：含有dNTP Mixture 和Mg2+
第一鏈cDNA合成步驟
1. 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系配制（推薦20 μL反應(yīng)體系）
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Component |
Volume |
|
5×Reaction Buffer |
4 μL |
|
Oligo (dT)18 Primer (100 μM) |
1 μL |
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or Random Hexamer Primer (100 μM) |
or 1 μL |
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or Gene Specific Primer (2 μM) |
or 1 μL |
|
SweScript RT I Enzyme Mix |
1 μL |
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Total RNA/mRNA* |
0.1 ng-5 μg/10 pg-0.5 μg |
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Nuclease-Free Water |
Add to 20 μL |
注：針對(duì)高GC或復(fù)雜模板，可預(yù)先混合RNA模板、逆轉(zhuǎn)錄引物、無(wú)核酸酶水并在65℃保溫5 min后，迅速置冰上冷卻。然后再加入其他反應(yīng)組份。
2. 輕輕混勻并離心；
3. 逆轉(zhuǎn)錄程序設(shè)置：
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Temperature |
Time |
|
25℃a |
5 min |
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50℃b |
15-30 min |
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85℃ |
5 s |
a：如選擇使用Random Hexamer Primer，25℃孵育5 min后，再進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)；如選擇使用Oligo (dT)18 Primer或Gene Specific Primer，可直接進(jìn)行50℃反應(yīng)；
b:對(duì)于高GC或復(fù)雜模板，可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高至55℃。
注意事項(xiàng)
1. 操作時(shí)請(qǐng)佩戴一次性手套，避免RNase污染。
2. 逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可以-20℃短期保存，若需長(zhǎng)期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
3. 如模板為真核生物來(lái)源，建議選擇Oligo (dT)18 Primer，與真核生物mRNA的3' Poly A尾配對(duì)，可獲得最高產(chǎn)量的全長(zhǎng)cDNA。
4. 原核生物RNA逆轉(zhuǎn)錄請(qǐng)選用Random Hexamer Primer或Gene Specific Primer。
5. Random Hexamer Primer適用性較廣，適用于mRNA、rRNA、tRNA、small RNA和LncRNA等模板。
6. 如逆轉(zhuǎn)錄后續(xù)為qPCR實(shí)驗(yàn)，可將Oligo (dT)18 Primer與Random Hexamer Primer混合使用，可使mRNA的各個(gè)區(qū)域cDNA合成效率相同，有助于提高定量結(jié)果的真實(shí)性和重復(fù)性。
本產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
凡合肥萬(wàn)物生物科技有限公司銷(xiāo)售的產(chǎn)品均有嚴(yán)格的質(zhì)量保證。如發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品存在包裝規(guī)格疑問(wèn)，請(qǐng)于收貨之日起七日內(nèi)向我公司總部或當(dāng)?shù)剞k事處提出，并請(qǐng)保證該產(chǎn)品，以備本公司進(jìn)行核對(duì)檢驗(yàn)。如果發(fā)現(xiàn)有質(zhì)量問(wèn)題，請(qǐng)于收貨后一月內(nèi)保留產(chǎn)品50%以上的量，以便本公司回收產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)檢，確認(rèn)產(chǎn)品質(zhì)量。如逾期，則視為已經(jīng)對(duì)本公司產(chǎn)品進(jìn)行驗(yàn)收。 聲明：如發(fā)生產(chǎn)品索賠事宜，本公司僅在產(chǎn)品價(jià)格范圍內(nèi)酌情賠償，恕不接受超出產(chǎn)品價(jià)格范圍之賠償。客戶(hù)在使用過(guò)程中有任何技術(shù)問(wèn)題可以撥打技術(shù)售后服務(wù)電話我們隨時(shí)給予解答。
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