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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Hoechst 33342(bisBenzimide H 33342,HOE 33342)分子式為C27H28N6O·3HCl,分子量為561.93,CAS編號(hào)為23491-52-3,是一種可以穿透細(xì)胞膜對(duì)細(xì)胞核內(nèi)DNA染色的藍(lán)色熒光染料;該染色液在溶液中熒光較弱,但在AT序列富集區(qū)域的DNA小溝處與之結(jié)合后熒光增強(qiáng),因此被用于細(xì)胞核染色,或者常規(guī)DNA染色。
本產(chǎn)品為溶液形式,Hoechst 33342濃度為1 mg/mL,用于染色時(shí),常用工作濃度推薦0.5-10 μg/mL。Hoechst 33342最大激發(fā)波長(zhǎng)為346 nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為460 nm;在與雙鏈DNA結(jié)合后,最大激發(fā)波長(zhǎng)為350 nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為461 nm;可用于固定或非固定的細(xì)胞或組織的細(xì)胞核標(biāo)記,并可通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀等儀器檢測(cè)。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
冰袋(wet ice)運(yùn)輸;
-20℃避光保存,12個(gè)月有效。
操作步驟
1. 將Hoechst 33342染色液(1 mg/mL)用PBS或其他合適的緩沖液稀釋成0.5-10 μg/mL Hoechst 33342染色工作液;
2. 對(duì)于固定的細(xì)胞或者組織切片:
a. 對(duì)于固定的細(xì)胞或組織樣品,固定后去除固定液,使用PBS或者其他合適的緩沖液洗滌2-3次,每次3-5 min(如檢測(cè)懸浮細(xì)胞,請(qǐng)按懸浮細(xì)胞常規(guī)操作方式進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)均需添加離心等步驟);
b. (可選步驟)如需對(duì)固定的細(xì)胞或者組織進(jìn)行免疫熒光染色等處理,則優(yōu)先進(jìn)行相關(guān)處理,處理后再進(jìn)行Hoechst 33342染色;
c. 取適量的Hoechst 33342染色工作液對(duì)固定的細(xì)胞或者組織進(jìn)行染色,覆蓋樣品并室溫孵育5 min左右;
d. 去除Hoechst 33342染色工作液后,用PBS或者其他合適的緩沖液洗滌2-3次,每次3-5 min;
e. 封片后或者直接置于熒光顯微鏡下觀察,激發(fā)波長(zhǎng)為350 nm,發(fā)射波長(zhǎng)為460 nm。
3. 對(duì)于活細(xì)胞或者培養(yǎng)組織:
a. 細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量Hoechst 33342染色工作液,約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積,須充分覆蓋待染色的樣品;通常六孔板一個(gè)孔中需加入1 mL染色液,96孔板一個(gè)孔中需加入100 μL染色液;于37℃培養(yǎng)箱中,孵育10-20 min;
b. 去除Hoechst 33342染色工作液后,用PBS或者其他合適的緩沖液洗滌2-3次,每次3-5 min;
c. 直接于熒光顯微鏡下觀察,激發(fā)波長(zhǎng)為350 nm,發(fā)射波長(zhǎng)為460 nm。
注意事項(xiàng)
1. Hoechst 33342染色工作液孵育的濃度和時(shí)間,可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。
2. 熒光染料存在淬滅的問(wèn)題,染色后盡量當(dāng)日完成檢測(cè),可用抗熒光淬滅封片劑減緩熒光猝滅。
3. 操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服,配戴一次性手套。
本產(chǎn)品僅供科研用途,不用于臨床診斷!
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