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產(chǎn)品詳情
操作說(shuō)明
注意事項(xiàng)
細(xì)胞介紹
這株細(xì)胞是2001年從人胚腎細(xì)胞株293衍化而來(lái)。293細(xì)胞用攜帶Zeocin-抗性標(biāo)記的質(zhì)粒pVgRXR轉(zhuǎn)染得到293pVgRXR細(xì)胞。隨后,用包含編碼E424K的Ad5E4ORF6基因的質(zhì)粒pEKORF6轉(zhuǎn)染。pEKORF6從包含潮霉素抗性基因的質(zhì)粒pIndHydro衍生而來(lái)。載體包含SV40病毒序列。
2V6.11細(xì)胞株最初從含潮霉素的培養(yǎng)液中用克隆環(huán)分離單克隆得到。2V6.11細(xì)胞誘導(dǎo)表達(dá)的人腺病毒E434KDa蛋白可通過(guò)免疫印跡法檢測(cè)。這株細(xì)胞可以用作研究腺病毒E4癌基因的工具。
細(xì)胞特性
1） 來(lái)源：人胚胎腎臟
2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)
3） 含量：>1x10^6 個(gè)/mL
4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運(yùn)輸和保存
可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式
（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；
（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
（3）收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。
細(xì)胞用途：僅供科研使用。
細(xì)胞接收后的處理：
1） 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2） 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3） 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。
4） 貼壁細(xì)胞：在運(yùn)輸過(guò)程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長(zhǎng)，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。
5） 懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。
6）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代 。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗 1%
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%FBS，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量完全培養(yǎng)基終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1:5比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
下面T25瓶為類；
1，細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
凡合肥萬(wàn)物生物科技有限公司銷售的產(chǎn)品均有嚴(yán)格的質(zhì)量保證。如發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品存在包裝規(guī)格疑問(wèn)，請(qǐng)于收貨之日起七日內(nèi)向我公司總部或當(dāng)?shù)剞k事處提出，并請(qǐng)保證該產(chǎn)品，以備本公司進(jìn)行核對(duì)檢驗(yàn)。如果發(fā)現(xiàn)有質(zhì)量問(wèn)題，請(qǐng)于收貨后一月內(nèi)保留產(chǎn)品50%以上的量，以便本公司回收產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)檢，確認(rèn)產(chǎn)品質(zhì)量。如逾期，則視為已經(jīng)對(duì)本公司產(chǎn)品進(jìn)行驗(yàn)收。 聲明：如發(fā)生產(chǎn)品索賠事宜，本公司僅在產(chǎn)品價(jià)格范圍內(nèi)酌情賠償，恕不接受超出產(chǎn)品價(jià)格范圍之賠償。客戶在使用過(guò)程中有任何技術(shù)問(wèn)題可以撥打技術(shù)售后服務(wù)電話我們隨時(shí)給予解答。
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