MTT細胞增殖與細胞毒性檢測試劑盒

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貨號：

FKU0196

產(chǎn)品規(guī)格：

500T

品牌：

萬物

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產(chǎn)品詳情操作說明注意事項

產(chǎn)品簡介

MTT全稱為3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide (Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide)，中文名簡稱：噻唑藍。分子式為C₁₈H₁₆BrN₅S，分子量為414.32。

圖片1.png

MTT常用于檢測細胞毒性和細胞增殖，其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細胞中，死細胞無此顯色反應(yīng)。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲臜，用酶標(biāo)儀測定其光吸收值，在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶甲臜形成的量與細胞數(shù)成正比。

傳統(tǒng)MTT檢測方法中，由于產(chǎn)生的甲臜是不溶于水的，需要先將上層含MTT底物的反應(yīng)液移除，再加入DMSO溶解甲臜，此步操作容易造成實驗的重復(fù)性、可現(xiàn)性較差。本試劑盒提供特殊的甲臜溶解劑，檢測時無需移除原有的含MTT底物反應(yīng)液，而是直接加入甲臜溶解劑，即可溶解甲臜，從而避免移除原有反應(yīng)液導(dǎo)致的誤差。

儲存與運輸

冰袋（wet ice）運輸；MTT溶液，-20℃避光保存；甲臜溶解劑，4°避光保存；有效期12個月。

使用說明

1. 對于細胞增殖檢測，每孔建議種板100 μL 2000個細胞；對于細胞毒性實驗，每孔建議種板100 μL 5000個細胞（具體視細胞大小、增殖速度調(diào)整）。根據(jù)句實驗需要進行培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染或給藥預(yù)處理；

2. 每孔加入10 μL MTT溶液，置于培養(yǎng)箱中孵育4 h；

3. 向孔板內(nèi)加入100 uL甲臜溶解劑，輕敲孔板使其混勻，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育2-4 h，使甲臜溶解（孵育時間視細胞數(shù)量調(diào)整，可在顯微鏡下觀察待甲臜溶解即可檢測）；

4. 在570 nm處測量各孔的吸光值。如無570 nm濾光片，可以使用560-600 nm濾光片。

注意事項

1. 如果細胞培養(yǎng)時間過長，為了防止液體蒸發(fā)，建議在96孔板外圈用水、PBS或者培養(yǎng)基等填充，以緩解蒸發(fā)。

2. 為減少實驗操作導(dǎo)致的誤差，建議設(shè)置復(fù)孔，在加樣或者震蕩混合時，避免產(chǎn)生氣泡。

3. MTT溶液為黃色，使用前需室溫放置或20-25℃水浴片刻至全部融解后使用。如果溶液呈灰綠色，請勿使用。

4. 甲臜溶解劑如果有沉淀析出，可以室溫或37℃水浴以促進溶解，待溶解混勻后再使用。

5. 為了您的健康和安全，操作時請穿實驗服，并佩戴一次性手套。

本產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！

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