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GH3 大鼠垂體瘤細胞

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貨號:
tings-52666
產(chǎn)品規(guī)格:
1*10?6
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產(chǎn)品詳情 操作說明 注意事項

細胞介紹

GH3細胞系是由Tashjian AH等在1965年7月從一只7月齡的雌性Wistar-Furth大鼠的垂體腫瘤中分離建立的。GH3細胞系不是直接來源于GH1細胞系的克隆,而是從原代培養(yǎng)的GH1細胞在大鼠身上傳代兩次形成的腫瘤中建立的。上皮樣的GH3細胞比GH1分泌更高水平的生長激素,也可產(chǎn)生催乳素。對調(diào)控GH3細胞分泌蛋白類激素的研究表明,氫化可的松可以刺激生長激素的分泌、抑制催乳素的產(chǎn)生。

細胞特性

1) 來源:大鼠,垂體瘤

2) 形態(tài):上皮細胞樣,疏松貼壁,有漂浮的細胞簇

3) 含量:>1x106

4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式

(1)干冰運輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇;

(2)存活細胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

(3)收到細胞后請拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時拍照與我們聯(lián)系。

細胞接收后的處理:

1) 收到細胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2) 在顯微鏡下確認(rèn)細胞生長狀態(tài)時,最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,能準(zhǔn)確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3) 觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4) 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。

5) 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。

6)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議1:2傳代 。

細胞培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1)準(zhǔn)備 F12K 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 優(yōu)質(zhì)胎牛血清2.5%;馬血清(國產(chǎn))15%,P/S青霉素-鏈霉素 1%;

細胞培養(yǎng)過程中貼壁不牢,疏松貼壁,有漂浮的細胞簇現(xiàn)象。

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二. 細胞處理:

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,收到細胞后首次傳代推薦將細胞懸液按1:2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,建議凍存一支備用,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2到1:5的比例進行。

方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。懸浮細胞凍存時,應(yīng)將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。

凡合肥萬物生物科技有限公司銷售的產(chǎn)品均有嚴(yán)格的質(zhì)量保證。如發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品存在包裝規(guī)格疑問,請于收貨之日起七日內(nèi)向我公司總部或當(dāng)?shù)剞k事處提出,并請保證該產(chǎn)品,以備本公司進行核對檢驗。如果發(fā)現(xiàn)有質(zhì)量問題,請于收貨后一月內(nèi)保留產(chǎn)品50%以上的量,以便本公司回收產(chǎn)品進行質(zhì)檢,確認(rèn)產(chǎn)品質(zhì)量。如逾期,則視為已經(jīng)對本公司產(chǎn)品進行驗收。 聲明:如發(fā)生產(chǎn)品索賠事宜,本公司僅在產(chǎn)品價格范圍內(nèi)酌情賠償,恕不接受超出產(chǎn)品價格范圍之賠償??蛻粼谑褂眠^程中有任何技術(shù)問題可以撥打技術(shù)售后服務(wù)電話我們隨時給予解答。

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